Aufgrund der steigenden Vorkommen resistenter bzw. multiresistenter Pathogene ist es notwendig neue Therapeutika mit antibiotischer Aktivität zu entdecken. Ein großes Potential besitzen die Bodenbakterien als Bildner neuer Antibiotika, allen voran die Gram-positiven Streptomyceten. Sie bilden u.a. Nicht-ribosomale Peptide (NRP). Um neuartige NRP zu entdecken, kann ein Genome Mining Ansatz verfolgt werden. In dieser Arbeit wurde ein neuartiges biosynthetisches Gencluster, welches für 2 Nicht-ribosomale Peptidsynthetasen codiert, identifiziert. Da in dem Cluster mehrere clusterspezifische Regulatoren und Gene für Selbstresistenzen enthalten sind, wurde angenommen, dass das NRP eine antibiotische Wirksamkeit besitzt. Ziel der Arbeit ist es das gebildete NRP zu identifizieren und isolieren.
- 187 Seiten
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Information
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9783736977105
Auflage
1Inhaltsverzeichnis
- 1. Einleitung
- 1.1 Bodenbakterien als Lieferanten für neue Wirkstoffe
- 1.2 Nicht-ribosomale Peptide und ihre Biosynthese
- 1.3 Identifizierung bioaktiver Sekundärmetabolite aus Mikroorganismen
- 1.4 Ziele der Arbeit
- 2. Material
- 2.1 Enzyme, Chemikalien und Verbrauchsmaterialien
- 2.2 Organismen und biologisches Material
- 2.3 Vektoren
- 2.4 Oligonukleotide
- 2.5 Kulturmedien und Lösungen
- 3. Methoden
- 3.1 Molekularbiologische Methoden
- 3.2 Biochemische Methoden
- 3.3 Mikrobiologische Methoden
- 3.4 Bestimmung der Bioaktivität
- 3.5 Analytische Methoden
- 3.6 Bioinformatische Methoden
- 4. Ergebnisse
- 4.1 Suche nach bioaktiven Naturstoffen aus Bodenbakterien
- 4.2 Suche nach bioaktiven Naturstoffen aus Streptomyces leeuwenhoekii
- 4.3 Suche nach bioaktiven Naturstoffen aus Streptomyces fragilis
- 5. Diskussion
- 5.1 Isolierung neuer Naturstoffe aus Bodenbakterien
- 5.2 Nutzung der Sequenzinformation zur Charakterisierung und Manipulation eines biosynthetischen Genclusters
- 5.3 Ausblick
- 6. Zusammenfassung
- 7. Literaturverzeichnis
- 8. Anhang
- 8.1 Sequenzierungsergebnisse der isolierten Bodenbakterien
- 8.2 Vektorkarten
- 8.3 Proteinsequenzen der Adenylierungsdomänen
- 8.4 Biologische Replikate der Bestimmung der Substratspezifität der Adenylierungsdomänen
- 8.5 Nachweis der homologen Rekombination in S. leeuwenhoekii
- 8.6 Elizitierung der Sekundärmetabolitproduktion von Streptomyceten